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輔酶I系列
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柱式法提取細胞 RNA 試劑盒
貨號：R1250
規格：50T/100T
保存：室溫（15℃-25℃）干燥保存，有效期 1 年。2℃-8℃保存時間更長。
注意：使用前請先在結合液中加入異丙醇，漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶體上的標簽。
產品簡介：
該試劑盒對經典的異硫氰酸胍抽提 RNA 的方法進行了改良。改良后的裂解液能迅速裂解細胞，釋放出 RNA 的同時滅活 RNase。RNA 在高離序鹽狀態下選擇性吸附于離心柱內硅基質膜上，再通過一系列漂洗和離心等步驟進一步將蛋白等雜質去除，最后用 RNase-Free ddH2O 將 RNA 從硅基質膜上洗脫。本試劑盒操作快速便捷，安全無需使用酚、氯仿等有毒試劑，操作安全。
操作步驟：
1、細胞裂解取 1*106~7 個細胞，每管加入 500ul 裂解液 A，加入 50ul 溶液 B 用移液槍吹打混勻，RT 放置 5min。
2、向離心管中加入 700μl 結合液 C(使用前請先檢查是否已加入異丙醇)，上下顛倒充分混勻。
3、向吸附柱中加入 600ul 混合液，靜置 1min。4℃ 12000rpm 離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管（收集管留下，用于步驟 5 使用）中。
備注：由于體積過大，需二次上柱，再將剩余混合液重復步驟 3
4、將吸附柱放到新的干凈的 2ml 收集管上，在吸附柱中加入 500μL RNA 洗脫液，4℃，12000rpm 離心 2min，收集濾液，扔掉吸附柱。
5、在濾液中加入 700μl 結合液，用移液槍吹打混勻后加入到新的吸附柱中，（使用步驟 3 的收集管），4℃，12000rpm 離心 2min，棄濾液。
備注：由于體積過大，需二次上柱，再將剩余混合液重復步驟 5
6、向離心管中加入 600μL 漂洗液 1（使用前請確認是否已加入無水乙醇），靜置1min，4℃，12000rpm 離心 1min，棄濾液。
7、向離心管中加入 600μL 漂洗液 2（使用前請確認是否已加入無水乙醇），4℃，12000rpm 離心 1min，棄濾液。
8、4℃，12000rpm 離心 2min，將吸附柱敞口室溫放置 3min，以除去多余的乙醇。
9、將吸附柱放到一個干凈的離心管上，向吸附柱中加入 30-100μL 洗脫液，室溫放置 2min，4℃，12000rpm 離心 2min，得到 RNA 溶液，RNA 保存于-80℃。
注意事項：
1、所有相關器皿耗材都應為 RNase-free 產品，操作過程要小心，帶口罩、手套避免環境中 RNA 酶污染樣品。
2、洗脫液的體積不應少于 30μL，體積過少會影響提取效率，RNA 產物應保存在-80℃，以防 RNA 降解。
3、RNA 濃度及純度檢測：提取的 RNA 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260/OD280 比值應為 2.0-2.2。
備注：106 細胞樣品，用 50μL RNase-free ddH2O 洗脫。
